微量样品柱层析

有机合成中经常会遇到微量样品的分离，通常情况下，对于少于100毫克的样品的纯化，有以下几种纯化方法：1、直接高效液相制备色谱(Prep-HPLC)纯化；2、制备薄层色谱(Prep-TLC, 俗称爬大板)；3、微量样品重结晶；4、微量柱层析法。微量柱层析法，相对于上述方法，更加经济绿色，而且操作方便，通常十几分钟就可以完成，相对于爬大板，不用浸泡硅胶，避免产生一些不必要的杂质。对于一些极性不是很大的产物，可以优先考虑此方法。但是没有柱子怎么柱层析呢？实验室中唾手可得的玻璃滴管就可以用于微量柱层析。

第一步：装柱

塞入少量棉花，用木棒压实，不要太紧，只需要防止硅胶漏下就可以。

装入硅胶，在桌面上轻轻地敲一敲，将硅胶压实，上方留4-5cm，用于上样和加洗脱剂。

 

和过大柱子类似，先用滴管在滴管柱上方加入小极性溶剂，通过不断加入溶剂，可以靠重力让柱子润湿。如果嫌慢，直接用乳胶头加压，但是一定要注意，挤压后千万不要松开，压完后拔下乳胶头再松开，否则会把硅胶和溶剂吸起来。当溶剂开始滴下时，完成润柱，但是一定要保持上方的溶剂不要干。

 

第三步：上样

与平时过大柱子类似，也分为湿法上样和干法上样，具体选哪种要根据样品的性质决定，如果产物极性较大而且溶解度好，可以考虑湿法上样。但是小编建议用干法，因为本来柱子就短，湿法上样会影响部分柱效，会导致分离效果不佳。

第四步：洗脱

根据TLC, 选择合适的溶剂配比, 不断加入溶剂洗脱，利用乳胶头加压，溶剂液面保持在硅胶上方，不要压干。还是要注意挤压乳胶头后不要松开，拔下再松开。由于柱子很小可以方便的根据分离难度，调节溶剂梯度。

及时更换容器，接收不同洗脱液，由于量很少小编建议用试管接收比较好，通过TLC或者LCMS确定所需产物。

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