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Sephadex LH-20使用说明

(2025-08-02 10:19:59) 下一个

中文名称: 葡聚糖凝胶 LH-20;其他名称:交联葡聚糖凝胶LH-20;交联右旋糖酐凝胶LH-20

英文名称:Sephadex LH-20;Cross-inked dextran gel LH-20

可用于分离胆固醇,脂肪酸,激素,维他命,天然产物等。

结构成分:交联右旋糖酐

颗粒直径:18~111um

操作温度:4~40℃

性状:白色珠粒或粉末,属亲脂性凝胶。是由葡聚糖G-25羟丙基化加工而成,属于分子筛凝胶

用途:生化研究。适用于凝胶过滤,天然产物在有机溶剂中的纯化。例如:类固醇、萜类、脂类以及小分子多肽等

1. 简介:

Sephadex G型葡聚糖凝胶只适合在水中使用,Sephadex G-25羟丙化后就是Sephadex LH-20。此君既有分子筛作用,在由极性与非极性溶剂组成的溶剂中还有反相层析效果。虽然价位很高,但由性能颇佳,可再生利用,所以倍受钦睐。此外上柱样品损失很少,对处理小样品较好,这也是我们实验室常用的原因之一。

Sephadex LH-20适合用于天然产物在有机溶剂中的纯化,可非常经济的大规模制备各种天然产物,尤其在中药有效成分提取中作为大孔吸附树脂解析物的纯化。

结合凝胶过滤﹑分配色谱及吸附层析于一身,能分离结构相近的分子。因此使用中要考略几种色谱的作用机制。

最高载量可达250mg样品/ml凝胶。建议初次上样量控制在1-2%的床体积,视分离情况可以逐步增加;柱高的选择也与分离要求相关――难分物质要有一定柱高和流速控制;流动相可参考TLC的条件,正确的流动相可以提高分离度并缩短分离时间。

流动相的常用溶剂为:水 甲醇 丙酮 乙酸乙酯 二氯甲烷

上述溶剂的极性依次降低,对带有极性的被分离物而言,保留值和分离度依次递增;同理选用的凝胶柱高可依次降低,流速可以增大(或上样量可以增加,树脂体积在低极性溶剂中明显收缩)。

需要考虑溶剂的溶解性,极性,沸点,毒性。

二氯甲烷通常对被分离物质间的极性和碱性差异比较小时采用。甲醇通常对带环状(包括苯环)物质分离采用,葡聚糖凝胶对环状物质有强烈吸附。

使用方法:将干粉浸泡于60—70%乙醇中过夜(充分搅拌),洗去可能存在的残留物,抽干然后湿态装柱,动态用一倍柱体积的60—70%乙醇淋洗,再用水洗净乙醇即根据自己选用的流动相体系平衡、上样

2. 原理:

Sephadex LH20的分离原理是根据分子大小,主要有两方面:以凝胶过滤作用为主,兼具反相分配的作用(在反相溶剂中)。因为凝胶过滤作用,所以大分子的化合物保留弱,先被洗脱下来,小分子的化合物保留强,最后出柱(具体原理可参见分子筛层析)。如果使用反相溶剂洗脱, Sephadex LH20对化合物还起反相分配的作用,所以极性大的化合物保留弱,先被洗脱下来,极性小的化合物保留强,后出柱。如果使用正相溶剂洗脱,这主要靠凝胶过滤作用来分离。

2.1 洗脱溶剂:

Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类:反相和正相两种。用得最多的是反相溶剂洗脱,以甲醇/水系统最为常见,先用水,逐渐增加甲醇比例,最后用100%甲醇冲柱。正相系统以氯仿/甲醇最为常见,先用50%氯仿/甲醇,逐渐增加甲醇比例,最后用100%甲醇冲柱。

2.2 处理选择:

如果样品极性大,就选用反相溶剂洗脱(甲醇/水),样品用最少体积的甲醇/水(尽可能甲醇少一些)溶解,过滤后,湿法上样。如果样品极性小,这选用正相溶剂洗脱(氯仿/甲醇),样品用最少体积的氯仿/甲醇溶解,过滤后,湿法上样。

2.3 分离技巧:

(1) 分离时流速不可太快,切切不可心急,所谓欲速则不达;接馏分时可开全速,节省时间。

(2)柱子尽可能长, Sephadex LH20 柱长的增加将极大地改善分离,所不要吝惜填料,宁可将填料全装在一根大柱子中,不要将填料装成几根小柱。所谓集中优势兵力,打击敌人。

(3) 馏分一定要接的细,可1/10,或1/20 个保留体积接成一馏分。

(4) 洗脱体积一般为2-3个保留体积,对特殊保留强的化合物,可洗脱5个保留体积。

(5)鞣质成分死吸附严重,如不在乎填料者,可用Sephadex LH20 分鞣质

(6)Sephadex LH20 对黄酮类成分的分离效果极佳,方法很成型,有大量文献参考。

(7)填料反复使用,每次用完,一般可用甲醇将柱子洗干净,然后用下一次分离的起步溶剂将甲醇替换出来,待用。暂时不用时,可以水洗→含水醇洗(醇的浓度逐步递增)→醇洗,最后泡在醇中贮于磨口瓶中备用。如长期不用时,可在以上处理基础上,减压抽干,再用少量乙醚洗净抽干,室温充分挥散至无醚味后,60~80°C干燥后保存。

发布于 2023-04-14 08:41?上海
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