薄层层析（TLC）是常用的一种分离和分析方法。
原理：利用吸附剂对样品中各组分吸附能力不同，及展开剂对它们的解吸附能力的不同，使各组分达到分离的目的。
特点：微量、快速、简单、节省。
分类：
吸附薄层层析（硅胶）
分配薄层层析（纤维素）
薄层离子交换层析（离子交换剂）
薄层凝胶层析（分子筛凝胶）
硅胶：表面带有硅醇基（-Si-OH），呈弱酸性（pH=4.5），活性硅胶适合分离酸性或者中性化合物，如酚类、有机酸、甾体化合物以及氨基酸类，是基于吸附作用。非活性硅胶含有一定的水，在分离色素时是基于分配作用。
氧化铝：弱碱性（pH=9）、酸性（pH=4）及中性（pH=7.5）三种氧化铝。弱碱性氧化铝用来分离中性或碱性化合物；中性氧化铝适用于酸性及对碱不稳定的化合物的分离；酸性化合物可用酸性氧化铝分离。
化学键合相（C18、C8等）
各种硅胶板的区别：
硅胶G：含有13%煅石膏（GYPSUM）粘合剂的硅胶。
硅胶H：不含粘合剂的硅胶。
硅胶HF254：不含粘合剂，含有一种无机荧光剂（如锰激活的硅酸锌），在254nm波长紫外光下，呈强烈黄绿色荧光。
硅胶GF254：含有煅石膏粘合剂，含荧光剂，在254nm波长紫外光下，呈强烈黄绿色荧光。
硅胶HF254+366：不含粘合剂，在254nm与366nm波长有荧光。
硅胶PF254：制备型，在254nm有荧光（有荧光剂，适用于不发光不易显色物质的制备与分离）。
几种硅胶板标注方法：
原点间距0.8~1mm，底边距离0.5~0.8cm即可。
反应液的取样：
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一般极性溶剂体系 |
强极性溶剂体系 |
需要淬灭的体系 |
强碱、酸性物质 |
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可以直接取样，也可以稀释后取样。 |
最好简单后处理（加水和有机溶剂萃取）以后取样。 |
处理（如加水或酸和有机溶剂）后取样 |
最好中和后取样 |
Note：1. 产品在水相或有机相
2. 有无没有溶解的固体
点样：
手动点样：灵活方便，常用于各种TLC鉴别中。
自动点样：重现性和准确性好，常用于薄层扫描法的含量测定。
点样量：原点位置的负荷有限，体积0.5~10ul，浓度通常为0.5~2mg。直径3mm以内。
样品溶剂：原则上应选择对样品可以溶解，但溶解度不是很大的溶剂。
Note：1. 点样的浓度要控制适当。
2. 点的斑点较小，展开的TLC分离度好。
3. 0.3mm毛细点有机相，0.5mm点水较方便。
点样常见问题：
1. 点样量太大。展开剂不能全部负载。
2. 太浓了。展开剂从原点外围绕行。
3. 浓。未分开。
4. 样品溶剂残留。吹干时应注意高温破坏样品。
5. 点样量太少。看不清楚。
6. 样品溶剂中溶解度很大。原点将变成空心圆。
展开剂的选择原则：
1. 对所需成分有良好的溶解性。
2. 可使各成分间有较好的分离。
3. 待测组分的Rf在0.2~0.8之间。
4. 不与待测组分发生化学反应。
5. 沸点适中，粘度较小。
6. 展开后组分斑点圆且集中。
7. 混合溶剂最好新鲜配置。
常用展开剂极性大小顺序：
石油醚＜二氯甲烷＜乙醚＜四氢呋喃＜乙酸乙酯＜丙酮＜正丙醇＜甲醇＜水
展开剂体系的选择原则：
※ 一般极性的化合物：PE/EA体系
※ 极性较大的化合物：DCM/CH3OH体系
※ 脂肪类胺化合物：在展开剂中加入0.1%（约为1滴）的氨水或三乙胺
※ 有羧基官能团存在的化合物：在展开剂中加入微量的醋酸（乙酸或甲酸的使用，一方面增大展开剂极性，另外也可以抑制硅胶上羟基的作用，减少拖尾）
另外常用的混合体系：
PE/DCM，PE/Acetone，Ether/DCM，EA/DCM，EA/CH3OH
展开方法：
展开方法有单向、单向长板、多次多种极性展开、双向展开等。
显色：
一看：首先在日光下观察，划出有色物质的斑点位置
二照：在紫外灯下观察有无暗斑或荧光斑点
三碘：大部分有机物会吸附碘可逆的产生棕色或黄色斑点
四显：既无色又无紫外吸收得物质，可以用显色剂显色
制备TLC
洗脱剂应避免加入过多的甲醇，以免产物中混有大量的硅胶。
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