调查研究小组“美国知情权 （USRTK） 已公开其获得的有关 EHA 于 2018 年 3 月提交给美国国防高级研究计划局 （DARPA） 的生态健康联盟“化解蝙蝠传播冠状病毒的威胁”（DEFUSE） 拨款提案的整批文件。
通过信息自由请求获得的 1,417 页文件文件的发布是在 USRTK 去年 12 月 18 日早些时候发布的 235 页文件之后发布的。
该文件包含 DEFUSE 提案的早期草案，该提案是在 PREventing EMerging Pathogenic Threats （PREEMPT） 计划的保护伞下提交给 DARPA 的。这些文件还包括有关该提案的电子邮件。
USRTK 昨天（1 月 18 日）发布了整批文件，此前当天早些时候，一位名叫“Gumby”的人在 X（推特）上分享了同一批文件，“Gumby”通过单独的信息自由 （FOI） 请求获得这些文件。
这两项 FOI 请求都是向美国地质调查局 （USGS） 提出的，该局是参与提交 DEFUSE 提案的组织之一。
“Gumby”说，他提出 FOI 请求是因为 USRTK 只公布了它获得的部分文件。
在“Gumby”收购了 USRTK 后，它急于发布其整批文件以及其记者 Emily Kopp 关于这些文件的文章。
根据调查组织 DRASTIC 于 2021 年 9 月公开的泄露文件，EHA 在其提案中要求在 3.5 年内总计 14,209,245 美元（第一阶段为 8,411,546 美元，第二阶段为 5,797,699 美元）。
EHA 提议将武汉病毒研究所 （WIV） 研究人员收集的嵌合蝙蝠冠状病毒注射到“球状”小鼠和基因改造以表达人类 ACE-2 受体的人源化小鼠中。
“Batified” 小鼠是经过辐照并注射蝙蝠骨髓的小鼠。
DEFUSE 提案包括关于计划将人类特异性切割位点引入蝙蝠冠状病毒的讨论。
罗格斯大学（Rutgers University）的微生物学家理查德·埃布赖特（Richard H. Ebright）是非政府组织“现在生物安全”（Biosafety Now）领导团队的成员，他于1月19日在推特上写道：“2018年生态健康提案为构建一种病毒提供了分步计划，该病毒具有一年后在武汉出现的病毒的序列和特性：SARS-CoV-2。
“EcoHealth 及其合作伙伴四年来的谎言现在需要结束。”
Ebright 于 1 月 18 日在推特上写道：“EcoHealth 2018 年 DARPA 提案草案中 BsmBI 的订单行相当于一把冒烟的枪。
Ebright 指的是可用于克隆的 BsmBI 限制性内切酶。
“作为一种 IIS 型限制性核酸内切酶，BsmBI 可用于无缝和非无缝定向克隆策略，”他在推特上写道。
出现在 DEFUSE 项目的 USGS 合作者 Tonie Rocke 的预计预算中的行。Emily Kopp 说，虽然 Rocke 准备与 Baric 合作，但目前尚不清楚她是否是这项基因工程工作的核心。
作家兼讲师 Jan Hommel 在 Covid-19 之前曾经是一名神经科医生，他在推特上发表了他对拟议的 BsmBI 收购相关性的看法。
Hommel 在推特上写道，在 DEFUSE 文件中发现购买提案就像找到一把带有谋杀案肇事者指纹的枪。
生物工程师和免疫学家瓦伦丁·布鲁特尔 （Valentin Bruttel） 表示，DEFUSE 草案文件（摘录如下）显示，生态健康联盟计划使用六个片段来组装合成病毒，“使用不会干扰编码序列的独特核酸内切酶位点，并购买 BsmBI”。
Emily Kopp 在她为 USRTK 撰写的报告中说，SARS-CoV-2 具有高度传染性，但在人类中没有发生太大进化。
“病毒'开箱即用，准备感染'，”她写道。“受体结合结构域似乎对人类 ACE2 受体进行了'微调'，但在首次溢出到人类体内时几乎没有遗传变异，这给试图证明它是自然出现的病毒学家提出了一个困难的'悖论'。”
她说，USRTK 获得的文件证实，与武汉实验室合作的科学家试图在他们的研究中选择与人类 ACE-2 结合良好的受体结合域 （RBD）。
“SARS-CoV-2 的基因组与 SARS 的遗传差异在 25% 的范围内，”Kopp 补充道。
Kopp 说，USRTK 获得的文件首次显示，与武汉实验室合作的一名病毒学家计划设计新的刺突蛋白——这与该合作将整个刺突蛋白插入病毒骨架的公开工作形成鲜明对比。
“提案中的语言表明，这项工作可能涉及未发表的病毒，产生了未发表的工程刺突蛋白，”她写道。
Bruttel 说，在他看来，DEFUSE 提案一直是“SARS2 如何产生的精确蓝图”。
USRTK 获得的文件草案包含“更多令人震惊的细节”，他在 1 月 18 日发推文说。
Bruttel、Alex Washburne 和 Tony VanDongen 于 2022 年 10 月发表了一篇预印本（于 2023 年 4 月更新），他们在其中指出，SARS-CoV-2 基因组包含一种通常在合成病毒中发现的限制性位点模式，但不存在于相关的天然病毒中。
他们解释说，为了在实验室中构建天然冠状病毒的合成变体，研究人员经常使用一种称为体外基因组组装的方法。
这三位科学家假设 SARS-CoV-2 是由六个片段组装而成的，使用 BsmBI 作为骨架，使用 Bsal 限制性核酸内切酶作为 RBD 或弗林蛋白酶切割位点 （FCS） 变体，并且这些限制性位点异常地引入了许多同义突变。
VanDongen 在 1 月 18 日发推文说：“对我们预印本的主要（显然没有根据的）批评之一是：'为什么只关注 BsmBI 和 Bsal？
“我们解释了这些酶如何成为 CoV 反向遗传学系统的首选，并受到 WIV 等实验室的青睐。现在我们有 DEFUSE 收购 BsmBI。甜蜜的......”
FCS 是四个氨基酸的片段，它使病毒能够利用人体内的弗林蛋白酶作为酶来溶解其涂层，从而释放其遗传物质来感染细胞。Furin 切割位点往往比使用其他酶的切割位点更具传染性。
Bruttel 解释说，弗林蛋白酶切割位点使冠状病毒能够感染新的宿主并导致严重疾病，因为它能够感染神经元。
“包括 [Ralph] Baric 和 Shi [Zhengli] 在内的病毒学家将 FCS 引入各种危险的冠状病毒刺突蛋白中，”他在推特上写道。
石正丽是武汉病毒研究所的高级科学家。拉尔夫·巴里克 （Ralph Baric） 在美国北卡罗来纳大学教堂山分校 （UNC） 负责冠状病毒研究。
Bruttel 说，DEFUSE 没有获得 DARPA 的资助，但研究人员有时会在资金获得批准之前就开始项目，WIV 非常相似的研究项目是由美国和中国的机构资助的。
他补充说，制造合成病毒也非常便宜。“根据 R. Baric 的说法，大约 6000 美元就足够了，”他在推特上写道。
SARS-CoV-2 的刺突蛋白由两个亚基 S1 和 S2 组成。S1 识别并与 ACE-2 结合，S2 介导病毒细胞膜融合。病毒的 FCS 位于 S1/S2 交界处。
已经提出的问题是“该网站是自然演变的，还是研究人员插入到该交界处的？科学家们过去曾尝试将 FSC 工程到 S1/S2 连接，他们反复进行了功能获得性研究。
Bruttel 说，一些病毒学家认为，DEFUSE 提案中只提到了刺突蛋白 S2 区域的 FCS，但提案草案实际上提到了 S1/S2 边界的 FCS。
在早期草案中指出：“在某些情况下，组织培养适应引入了弗林蛋白酶切割位点，该位点也可以指导进入过程，通常是通过切割其他冠状病毒 S2 中 757 位和 900 位的 S，而不是 SARS。
位置 757 是 S1/S2 站点，位置 900 是 S2 站点。
以下摘自 DEFUSE 提案的早期草案，指的是 S1/S2 边界的 FCS。
EHA 的最终提案包括在蝙蝠冠状病毒中引入“人类特异性切割位点”。
“有人提出了人类蛋白酶特异性位点插入，”DRASTIC 在 2021 年发布泄露文件时表示。
“该提案没有具体说明哪种蛋白酶，但确实在前面的文本中讨论了弗林蛋白酶。”
HAE（人气道上皮）培养物可有效模拟人支气管环境。
USRTK 表示，Ralph Baric 计划每年设计 20 个或更多“嵌合”SARS 相关病毒刺突蛋白，以及 2 到 5 个全长工程 SARS 相关病毒。
Jan Hommel 在 X （Twitter） 上的评论中提到了 Bruttel、Washburne 和 VanDongen 在 bioRxiv 上发布的预印本。
他说，SARS-CoV-2 的基因组中有许多切割位点，确保病毒可以被切割成碎片，从而可以轻松地将它们与另一个基因交换，就好像它是一个模块一样。
“此外，与 BANAL52 和 RaTG13 等类似病毒相比，这些切割位点在基因组中的分布要规则得多。”
Hommel 说，这与“反向遗传学”系统非常契合，该系统允许人们快速轻松地制造人工病毒，“因为你可以轻松地将这六个片段中的每一个替换为来自不同病毒的另一个片段”，包括包含 RBD 和 FCS 的部分。
Washburne 等人在他们的预印本中说：“区分 SARS-CoV-2 限制性位点的突变类型（同义或沉默突变）是工程学的特征，这些沉默突变在限制性位点中的集中极不可能是由随机进化产生的。限制性位点指纹和产生它们的突变模式在野生冠状病毒中极不可能，而在合成病毒中几乎普遍存在。我们的研究结果强烈表明 SARS-CoV-2 的合成来源。
他们说，SARS-CoV-2 的限制性图谱与许多以前报道的合成冠状病毒基因组一致，符合有效反向遗传系统所需的所有标准，“与近亲不同的是，在这些看起来像合成的识别位点中，同义突变率要高得多”，并且具有合成指纹，不太可能是从其近亲进化而来的。
怀特黑德研究所人类基因组计划研发主管/麻省理工学院 Kevin McKernan 于 1 月 19 日在推特上写道：“许多人不想谈论实验室泄漏，因为他们将其视为叙事和心理分析的一部分。但最终确定这是实验室起源的证据昨天下降了。DEFUSE 提案列出了@VBruttel@WashburneAlex预测的@tony_vandongen酶的零件编号。
USRTK 表示，EHA 主席彼得·达扎克 （Peter Daszak） 和拉尔夫·巴里克 （Ralph Baric） 向五角大楼隐瞒了他们打算在宽松的安全标准下在武汉进行高风险冠状病毒研究的意图。
DEFUSE 提案的早期草案包含来自“PD”和“BRS”的评论，电子邮件显示 PD 是 Daszak，BRS 是 Baric。
USRTK 表示，该草案表明，EHA 提议在武汉进行 DEFUSE 实验，其安全预防措施比美国要求的要少——显然是为了节省成本。
DEFUSE 提案的早期草案指出，新型冠状病毒的工程和测试将在生物安全二级 （BSL-2） 条件下进行。
然而，BSL-2 后来被编辑为 BSL-3。
在对该文件的评论中，巴里克表示，如果美国研究人员知道新型冠状病毒的工程和测试工作将在 BSL-2 实验室进行，他们可能会“吓坏”。
在最终的 DEFUSE 提案中指出：“使用蝙蝠和/或转基因小鼠的实验工作将在 WIV、杜克-新加坡国立大学、北卡罗来纳大学或 NWHC [美国地质调查局国家野生动物健康中心] 的 BSL-3 实验室进行。
还指出，新加坡和美国的 WIV 和实验室将使用活蝙蝠进行感染实验，通常使用圈养的蝙蝠群落。
新发布的文件中的注释显示，拉尔夫·巴里克 （Ralph Baric） 设计的刺突蛋白并未出现在公共科学文献中，“而且在提案提交给 DARPA 时，这项工作可能已经在进行中”，艾米丽·科普 （Emily Kopp） 写道。
文件中说明了以下内容：
“虽然 HKU3 蝙蝠病毒是已知的，但对'称为 293 的蝙蝠病毒'的提及是模棱两可的，似乎并不是指任何公共病毒组，”Kopp 写道。
科普说，新发布的文件挑战了美国国立卫生研究院（National Institutes of Health）和一些病毒学家反对该研究提案与大流行起源相关性的论点。
她写道：“他们认为，这项美中科学合作只是计划从公共文献中已有的病毒骨架开始设计病毒，而这些病毒骨架太不同了，不可能在大流行中发挥作用。
“然而，新文件显示，科学家们计划使用新的反向遗传学系统并在体内测试病毒——换句话说，设计活的新型病毒。
“这些文件将资助中要研究的 SARS 相关病毒描述为构成'类似 SARS 的新大流行的明确和现实的危险'。”
更新： 1 月 21 日，关于寻找 Covid-19 起源的《病毒》一书的合著者 Alina Chan 在推特上写道：“冒烟的枪意味着确凿的证据。这意味着被告无法证明自己的清白。我认为迄今为止没有任何公开可用的 #OriginOfCovid 证据符合该定义。但很明显，重要证据一直并且可能仍在被隐瞒。
她还说：“无论你如何看待拆解草案，问题是为什么武汉科学家和他们的美国合作者在2018-2019年的所有交流都没有传票？
在后续推文中，Chan 说：“Defuse 是可能的实验室的令人信服的证据 #OriginOfCovid 我认为实验室泄漏应该是默认假设。然而，公开可用的证据存在差距。我们不知道 2018-2019 年武汉病毒研究所发生了什么。
1 月 21 日，Chan、Bruttel、Washburne 和 VanDongen 在 Twitter 空间与 BioSafety Now 的 Justin Kinney 和 Bryce Nickels 进行了讨论。*
在长达两个多小时的极其深入的对话中，科学家们谈到了支持实验室起源假说、DEFUSE 提案以及 Bruttel 等人进行的研究的现有证据。
Chan 说，建制派科学家曾试图恐吓其他提出 SARS-CoV-2 可能实验室起源问题的科学家，称他们为幼儿园儿童，贬低他们，并说他们不知道自己在说什么。
金尼说：“非常令人沮丧的是，我们仍在从《信息自由法》的要求中了解到如此关键的信息......令人震惊的是，联邦政府没有对这种病毒的起源进行积极的调查。
他说，有充分的理由相信，美国 UNC（北卡罗来纳大学教堂山分校）和 EcoHealth Alliance 都有更多关于 Covid-19 大流行起源的信息。
他补充说，虽然对于最近发布的有关 DEFUSE 拨款提案的文件是否是“冒烟的枪”存在意见分歧，但大量科学证据指向 SARS-CoV-2 的基因工程起源。
Bruttel 提到了 DEFUSE 文件并非由相关人员自愿提供的事实：“我们应该把这里的每一块石头都交出来。我们应该搜索这些实验室。我们应该查看新加坡、美国和中国参与 DEFUSE 的团队的每一台计算机，“他说。
自 2020 年 7 月以来，USRTK 通过信息自由请求获得的所有文件均可在此处获得。
*更新：
Kinney 补充说：“展望未来，我也将无法就 SARS-CoV-2 的起源、对科学的影响以及未来实验室产生的大流行病的风险发表公众评论。
他在推特上写道：“如果您是一名科学家，并且担心 SARS-CoV-2 的起源、对科学的影响以及未来实验室产生的大流行病的风险，**请大声说出来**。少数科学家就这些问题发表意见可以产生很大的不同。
科学家表示，生态健康联盟的 DEFUSE 提案是 SARS-CoV-2 的蓝图——改变时代 (changingtimes.media)
